当斯特灵城堡成为了王室领地住宅的一部分后，于1490年至1600年之间开始了上百年的修建工程。在詹姆斯四世，詹姆斯五世和詹姆斯六世的统治期间，这座城堡更是成为了苏格兰王室最主要的居住地。而在这上百年的修建时间里，三位国王受到英格兰，法兰西和神圣罗马帝国的建筑风格的影响，将三个王国的建筑风格融合到了斯特灵城堡的建筑中，这也反映了斯图尔特王朝的国际野心。
从詹姆斯四世（1488年-1513在位）开始的建筑工程，直到他在弗洛登战役中去世时也尚未完工，他的继任者詹姆斯五世（1513年-1542年在位）在未完工的城堡王室礼拜堂内加冕，并在厄斯金勋爵的监护下在城堡中长大。
詹姆斯五世继续并扩展了他的父亲的建筑计划，修造了城堡的核心——苏格兰王室的王宫。在芬纳特的詹姆斯·汉密尔顿爵士和法国带来的泥瓦匠的指导下，进行建造工作。不过，令人感到不可思议的是，詹姆斯五世同样在去世前也没有完成对斯特灵城堡的建造工作。
随后，建造城堡的工作由他的遗孀吉斯王后来完成，他们的女儿玛丽·斯图亚特——苏格兰女王也被带到斯特灵城堡内保护起来。当玛丽女王于1548年被送到法国后，在1550年代即吉斯王太后的摄政期间，英法敌对行动仍旧在苏格兰进行。这个时候，斯特灵城堡的南面被建造成了炮兵防御工事，这些防御工事构成了现在的外部防御的基础。
在这之前，亨利八世为了得到玛丽女王而发动的苏格兰战争进行到1547年时，玛丽女王又被带到了距离城堡约15英里（约241公里）外的门蒂斯湖中的一个最大的岛屿上。继而，女王被藏匿在了岛屿上的因奇玛豪姆修道院内。
值得一提的是，因奇玛豪姆修道院的这个名字来源于盖尔语的英尼斯·莫尔克迈格，意思是圣科尔马格岛。1238年，苏格兰的门蒂斯伯爵出资建造了该修道院。这座修道院在以后的数百年间，十分幸运地成为了数位国王及女王的避难所。
1930年，英国著名的旅行作家V莫顿在访问该岛屿和修道院时，曾写道:“在湖的中间，有一个灰色的，在奇怪的阴影中升起并落下的影子。好像曾经神圣的因奇玛豪姆小岛是用湖水建造的，如同海市蜃楼一般。
这个小岛是苏格兰的圣地之一。正是在这里，我们能想到的苏格兰玛丽女王的生活，女王在这里的花园内度过了她的人生的第一次快乐时光。传说修道院内的每一个地方都贴有标签，如女王的凉亭，女王的树，女王的房间。”
尽管玛丽女王在该修道院内只躲避了几周的时间，但是苏格兰人宣称他们的女王就是在这座修道院开始了学习外国语言和针线刺绣的人生经历。并且，从玛丽女王登上该岛并躲藏在修道院开始，她的身边便出现了苏格兰历史上有名的“四位玛丽”侍女。
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从以上的各个历史时间来看，玛丽女王仍旧被藏匿在斯特灵城堡内并一直生活到1547年。不过，伊莎贝尔·沃尔顿和她的偷袭小队并不知道这些王室秘闻，她只是借着清晰的头脑认定玛丽女王会躲藏在离爱丁堡城堡最近的某个城堡，庄园，教堂或是修道院内。
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